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產(chǎn)品名稱 | 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來自NIH3T3)；PA12 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63238 |
細(xì)胞名稱 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來自NIH3T3)；PA12
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞來自NIH/3T3，可作逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝細(xì)胞。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:3傳代；3~4天1次。
傳代情況: C5
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品特點(diǎn):
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
人外周血B淋巴細(xì)胞；IM-9形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長Mouse GAS6 ELISA KIT
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92MI[NK92MI]形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣生長特性: 懸浮生長羊白介素6（Sheep IL-6）Elisa試劑盒
人肝腹水腺癌細(xì)胞；SK-HEP-1形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Human GFAP ELISA KIT
人肺癌細(xì)胞；TKB-1形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Human pro-BDNF ELISA KIT
人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38[WI38]形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Rabbit BMP5 ELISA Kit
非洲綠猴腎細(xì)胞；GL-37形態(tài)特性: 生長特性: 貼壁生長Human CD258 ELISA KIT
人肝癌細(xì)胞；HHCC形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Chicken IL-10 ELISA Kit
人胎兒胸腺細(xì)胞株；HFT-8810[HFT8810]形態(tài)特性: 生長特性: 貼壁生長Human SCGN ELISA KIT
人肝癌細(xì)胞；HB611形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Human BMP-4 ELISA KIT
小鼠白血病細(xì)胞；P388形態(tài)特性: 生長特性: 貼壁生長Human NGF R ELISA KIT
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（人膀胱癌細(xì)胞污染）；ECV-304[ECV304；ECV304]形態(tài)特性: 生長特性: 懸浮生長Human BMP-5 ELISA KIT
牛腎細(xì)胞；MDBK(NBL-1)形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Human UPAR ELISA KIT
人肝癌細(xì)胞；PLC/PRF/5形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣生長特性: 貼壁生長Human NT-3 ELISA KIT
牛陀螺狀細(xì)胞；BT形態(tài)特性: 生長特性: 貼壁生長Human FGFR2 ELISA KIT
恒河猴腎細(xì)胞；LLC-MK2形態(tài)特性: 生長特性: 貼壁生長Mouse IL-33R ELISA KIT
人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞；RD形態(tài)特性: 梭型和大的多核細(xì)胞生長特性: 貼壁生長Mouse IgG3 ELISA KIT
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(來自NIH3T3)；PA12小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒AmylinELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒ANAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒ANAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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