公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63719 |
細(xì)胞名稱 胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 該細(xì)胞系來(lái)自一女性胎兒的正常腎組織。中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)于1986年建立。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P4
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 熒光法(-)
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
8-(1,1-Dimethyl-2-propenyl)kaempferol
CAS No.:142646-43-3
中文名:
分子式:C20H18O6
東莨菪內(nèi)酯 訂購(gòu)|咨詢 脫氧核糖核酶Ⅰ(DNASE1) 規(guī)格: 20mg
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金 訂購(gòu)|咨詢 著絲粒蛋白B(CENPB) 規(guī)格: 200mg
phosphoBACH1/BRIP1(Ser990) 癌易感基因相互作用蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Pentabromophenyl ether
Adenylate Kinase 1/AK1 腺苷激酶1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml 3Amino3azabicyclo[3.3.0]octane hydrochloride
CTNNBIP1 β鏈接素相互作用蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Kasugamycin
phosphoCTNNBIP1 (Ser36) β鏈接素相互作用蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Tulathromycin A
phosphoCTNNBIP1 (Thr43/Ser50) β鏈接素相互作用蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Tulathromycin A
AKR1D1 醛固還原酶家族1成員D1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Latamoxef sodium
ALDH1B1 脫氫酶5抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Procyanidin
ALDOB 醛縮酶2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.1ml Procyanidin
DL精 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:DLArginineHC1 含量:BR,99%
D甲酯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:DAlanineMethylEsterHydrochloride 含量:BR,98%
D甘露糖 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:DMannosamineHC1 含量:高純,98%
D酪甲酯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:DTyrosineMethylesterhydrochloride 含量:ACS,98%
L甲酯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:LAlaninemethylesterhydrochloride 含量:BR,98%
L酪甲酯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:LTyrosinemethylesterhydrochloride 含量:ACS,98%
N,N二甲基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:N,NDimethylglycinehydrochloride 含量:BR
Na甲酰L精酯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:BAEE 含量:BR,98%
黃 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Acriflavinehydrochloride 含量:BR,99%
進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 英文名稱:Acridinehydrochloride 含量:AR,99%
胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2硝鹽肉湯規(guī)格:250g用途:用于蠟樣芽孢桿菌硝鹽還原試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
醇類中和增菌培養(yǎng)基(帶棉簽)規(guī)格:10ml*20/盒用途:主要用于含有醇類消劑樣品的增菌培養(yǎng)
亮綠乳糖膽鹽培養(yǎng)基(BGB)規(guī)格:250g用途:用于飲用天然礦泉水中大腸桿菌的檢驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
七葉苷(進(jìn)口)規(guī)格:10g用途:微生物指示劑
哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)(改良)規(guī)格:250g用途:用于鏈球菌等苛求菌培養(yǎng)
改良GAM瓊脂規(guī)格:250g用途:用于脆弱抑桿菌的分離培養(yǎng)
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。